記述言語：英語   掲載種別：研究論文（学術雑誌）   出版者・発行元：Biochemical and Biophysical Research Communications  

The chemotherapeutic agent tegafur, a prodrug that prolongs the half-life of fluorouracil (5-FU), exerts antitumor effects against various cancers. Since tegafur is metabolized to 5-FU by CYP2A6 in the liver, the expression of CYP2A6 determines the effect of tegafur. Here, we report that the expression rhythm of Cyp2a5, a homolog of human CYP2A6, in female mice causes dosing time-dependent differences in tegafur metabolism. In the livers of female mice, CYP2A5 expression showed a circadian rhythm, peaking during the dark period. This rhythm is regulated by RORA, a core clock component, and abrogation of the CYP2A5 activity abolished the time-dependent difference in the rate of tegafur metabolism in female mice. Furthermore, administration of tegafur to mice transplanted with 4T1 breast cancer cells during the dark period suppressed increases in tumor size compared to female mice treated during the light period. Our findings reveal a novel relationship between 5-FU prodrugs and circadian clock machinery, potentially influencing antitumor effects, and contributing to the development of time-aware chemotherapy regimens for breast cancer.

DOI： 10.1016/j.bbrc.2024.149813

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記述言語：英語   掲載種別：研究論文（学術雑誌）   出版者・発行元：International Journal of Molecular Sciences  

The leading cause of death for patients with Duchenne muscular dystrophy (DMD), a progressive muscle disease, is heart failure. Prostaglandin (PG) D2, a physiologically active fatty acid, is synthesized from the precursor PGH2 by hematopoietic prostaglandin D synthase (HPGDS). Using a DMD animal model (mdx mice), we previously found that HPGDS expression is increased not only in injured muscle but also in the heart. Moreover, HPGDS inhibitors can slow the progression of muscle injury and cardiomyopathy. However, the location of HPGDS in the heart is still unknown. Thus, this study investigated HPGDS expression in autopsy myocardial samples from DMD patients. We confirmed the presence of fibrosis, a characteristic phenotype of DMD, in the autopsy myocardial sections. Additionally, HPGDS was expressed in mast cells, pericytes, and myeloid cells of the myocardial specimens but not in the myocardium. Compared with the non-DMD group, the DMD group showed increased HPGDS expression in mast cells and pericytes. Our findings confirm the possibility of using HPGDS inhibitor therapy to suppress PGD2 production to treat skeletal muscle disorders and cardiomyopathy. It thus provides significant insights for developing therapeutic drugs for DMD.

DOI： 10.3390/ijms25031846

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記述言語：英語   掲載種別：研究論文（学術雑誌）   出版者・発行元：International Journal of Molecular Sciences  

Prostaglandins are bioactive compounds, and the activation of their receptors affects the expression of clock genes. However, the prostaglandin F receptor (Ptgfr) has no known relationship with biological rhythms. Here, we first measured the locomotor period lengths of Ptgfr-KO (B6.129-Ptgfrtm1Sna) mice and found that they were longer under constant dark conditions (DD) than those of wild-type (C57BL/6J) mice. We then investigated the clock gene patterns within the suprachiasmatic nucleus in Ptgfr-KO mice under DD and observed a decrease in the expression of the clock gene cryptochrome 1 (Cry1), which is related to the circadian cycle. Moreover, the expression of Cry1, Cry2, and Period2 (Per2) mRNA were significantly altered in the mouse liver in Ptgfr-KO mice under DD. In the wild-type mouse, the plasma prostaglandin F2α (PGF2α) levels showed a circadian rhythm under a 12 h cycle of light–dark conditions. In addition, in vitro experiments showed that the addition of PTGFR agonists altered the amplitude of Per2::luc activity, and this alteration differed with the timing of the agonist addition. These results lead us to hypothesize that the plasma rhythm of PGF2α is important for driving clock genes, thus suggesting the involvement of PGF2α- and Ptgfr-targeting drugs in the biological clock cycle.

DOI： 10.3390/ijms25031841

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記述言語：英語   掲載種別：研究論文（学術雑誌）  

記述言語：英語   掲載種別：研究論文（学術雑誌）   出版者・発行元：Biochemical and Biophysical Research Communications  

Chronic kidney disease (CKD) induces an imbalance in the intestinal microbiota, affecting various physiological functions and leading to cardiovascular inflammation and fibrosis. However, the cardiotoxic impact of intestinal microbiota-derived uremic substances in advanced renal dysfunction remains unexplored. Therefore, we developed a 5/6 nephrectomy (5/6Nx) mouse model to investigate the intestinal microbiota and the effects of administering vancomycin (VCM) on the microbiota and the cardiac pathology associated with CKD. Despite VCM administration after the development of irreversible glomerulosclerosis and tubulointerstitial fibrosis, blood indoxyl sulfate and phenyl sulfate levels, which are intestinal bacteria-derived uremic substances, brain natriuretic peptide levels, and the fibrotic area in the heart were decreased. Moreover, VCM administration prevented 5/6Nx-induced weight loss and prolonged survival time. Our findings suggest that VCM-induced changes in the intestinal microbiota composition ameliorate heart failure and improve survival rates by reducing intestinal microbiota-derived cardiotoxic substances despite advanced renal dysfunction. This highlights the potential of using the intestinal microbiota as a target to prevent and treat cardiovascular conditions associated with CKD.

DOI： 10.1016/j.bbrc.2023.07.015

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記述言語：英語   掲載種別：研究論文（学術雑誌）   出版者・発行元：Biochemical Pharmacology  

Proteins localize to their respective organelles in cells. This localization is changed by activation or repression in response to signal transduction. Therefore, the appropriate intracellular localization of proteins is important for their functions to be exerted. However, difficulties are associated with controlling the localization of endogenous proteins. In the present study, we developed a conceptually new method of controlling the intracellular localization of endogenous proteins using bispecific nanobodies (BiNbs). BiNbs recognize proteins expressed in the inner membrane, cytoskeleton, nucleus, and peroxisomes, but not in mitochondria or endoplasmic reticulum. BiNbs designed to recognize β-CATENIN and the intrinsic cytosolic protein VIMENTIN (3 × Flag β-CAT-VIM BiNbs) decreased the β-CATENIN-mediated transactivation of target genes by preventing its nuclear localization. Furthermore, 3 × Flag β-CAT-VIM BiNbs suppressed the proliferation and invasion of the VIMENTIN-expressing breast cancer cell line MDA-MB-231, but not MDA-MB-468, in which the expression of VIMENTIN was defective. The present results revealed that changes in the intracellular localization of specific proteins by BiNbs modulated the physiology and functions of cells. The development of BiNbs to recognize proteins specifically expressed in target cells may be a useful approach for eliciting cell-selective effects.

DOI： 10.1016/j.bcp.2023.115708

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記述言語：英語   掲載種別：研究論文（学術雑誌）  

DOI： 10.1021/acs.jmedchem.3c00737

記述言語：英語   掲載種別：研究論文（学術雑誌）   出版者・発行元：Journal of the American Chemical Society  

Detection of metabolic activity enables us to reveal the inherent metabolic state of cells and elucidate mechanisms underlying cellular homeostasis and growth. However, a fluorescence approach for the study of metabolic pathways is still largely unexplored. Herein, we have developed a new chemical probe for the fluorescence-based detection of fatty acid β-oxidation (FAO), a key process in lipid catabolism, in cells and tissues. This probe serves as a substrate of FAO and forms a reactive quinone methide (QM) as a result of metabolic reactions. The liberated QM is covalently captured by intracellular proteins, and subsequent bio-orthogonal ligation with a fluorophore enables fluorescence analysis. This reaction-based sensing allowed us to detect FAO activity in cells at a desired emission wavelength using diverse analytical techniques including fluorescence imaging, in-gel fluorescence activity-based protein profiling (ABPP), and fluorescence-activated cell sorting (FACS). The probe was able to detect changes in FAO activity induced by chemical modulators in cultured cells. The probe was further employed for fluorescence imaging of FAO in mouse liver tissues and revealed the metabolic heterogeneity of FAO activity in hepatocytes by the combination of FACS and gene expression analysis, highlighting the utility of our probe as a chemical tool for fatty acid metabolism research.

DOI： 10.1021/jacs.3c02043

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記述言語：英語   掲載種別：研究論文（学術雑誌）   出版者・発行元：Journal of Medicinal Chemistry  

The coronavirus disease 2019 (COVID-19) pandemic has necessitated the development of antiviral agents against severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2). 3C-like protease (3CLpro) is a promising target for COVID-19 treatment. Here, we report a new class of covalent inhibitors of 3CLpro that possess chlorofluoroacetamide (CFA) as a cysteine-reactive warhead. Based on an aza-peptide scaffold, we synthesized a series of CFA derivatives in enantiopure form and evaluated their biochemical efficiency. The data revealed that 8a (YH-6) with the R configuration at the CFA unit strongly blocks SARS-CoV-2 replication in infected cells, and its potency is comparable to that of nirmatrelvir. X-ray structural analysis showed that YH-6 formed a covalent bond with Cys145 at the catalytic center of 3CLpro. The strong antiviral activity and favorable pharmacokinetic properties of YH-6 suggest its potential as a lead compound for the treatment of COVID-19. © 2022 American Chemical Society.

DOI： 10.1021/acs.jmedchem.2c01081

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その他リンク： https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.jmedchem.2c01081

記述言語：英語   掲載種別：研究論文（学術雑誌）   出版者・発行元：Molecular Cancer Research  

Cancer cells have acquired several pathways to escape from host immunity in the tumor microenvironment. Programmed death 1 (PD-1) receptor and its ligand PD-L1 are involved in the key pathway of tumor immune escape, and immune checkpoint therapy targeting PD-1 and PD-L1 has been approved for the treatment of patients with certain types of malignancies. Although PD-1 is a well-characterized receptor on T cells, the immune checkpoint receptor is also expressed on tumor-associated macrophages (TAM), a major immune component of the tumor microenvironment. In this study, we found significant diurnal oscillation in the number of PD-1–expressing TAMs collected from B16/BL6 melanoma-bearing mice. The levels of Pdcd1 mRNA, encoding PD-1, in TAMs also fluctuated in a diurnal manner. Luciferase reporter and bioluminescence imaging analyses revealed that a NF-kB response element in the upstream region of the Pdcd1 gene is responsible for its diurnal expression. A circadian regulatory component, DEC2, whose expression in TAMs exhibited diurnal oscillation, periodically suppressed NF-kB–induced transactivation of the Pdcd1 gene, resulting in diurnal expression of PD-1 in TAMs. Furthermore, the antitumor efficacy of BMS-1, a small molecule inhibitor of PD-1/PD-L1, was enhanced by administering it at the time of day when PD-1 expression increased on TAMs. These findings suggest that identification of the diurnal expression of PD-1 on TAMs is useful for selecting the most appropriate time of day to administer PD-1/PD-L1 inhibitors. Implications: Selecting the most appropriate dosing time of PD-1/ PD-L1 inhibitors may aid in developing cancer immunotherapy with higher efficacy.

DOI： 10.1158/1541-7786.MCR-21-0786

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記述言語：英語   掲載種別：研究論文（学術雑誌）  

DOI： 10.1111/gtc.12758

記述言語：英語   掲載種別：研究論文（学術雑誌）  

DOI： 10.1016/j.bbrc.2019.02.022

記述言語：英語   掲載種別：研究論文（学術雑誌）  

DOI： 10.1016/j.ebiom.2016.10.008

記述言語：英語   掲載種別：研究論文（学術雑誌）  

DOI： 10.1074/jbc.M115.696930

出版者・発行元：Heliyon  

The retina is the only organ projecting external light to the suprachiasmatic nucleus. Cholecystokinin receptor type A (Cckar/Cckar) is one of the essential factors for light reception in retinal cells. As there was a lack of literature on the matter, we aimed to elucidate the cause of the time-dependent phase change in clock gene expression. We found that Cckar mRNA expression in retinal cells exhibited diurnal variations. The rhythm of expression of the clock gene Per1/Per2 in retinal cells was altered in Cckar−/− mice. The light sensitivity of retinal cells was evaluated in wild-type mice, which showed c-Fos was activated in the ganglion cell layer more than in the inner granular layer. This increase in the number of c-Fos-positive cells was suppressed by lorglumide, a Cckar antagonist. Treatment of rat retina primary cells with lorglumide suppressed Per2 transcription, which was altered in a time-dependent manner relative to the Per2 expression. Light irradiation studies in Cckar−/− mice did not exhibit an increase in Period expression in the suprachiasmatic nucleus. These results indicate that Cckar is among the factors that regulate the cycle of clock genes on the retina. Cckar knockout attenuates the light responsiveness of suprachiasmatic nucleus and reduces the expression amplitude of Period genes in the retina. Thus, Cckar may contribute to entrainment of the light environment and maintenance of the expression cycle of Period gene, which is one of the core clock genes.

DOI： 10.1016/j.heliyon.2024.e32653

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記述言語：日本語   出版者・発行元：一般社団法人 日本臨床薬理学会  

<p>【目的】CYP3A4は臨床で使用されている薬物の約半数の代謝に関与する極めて重要な酵素である。CYP3A4の基質薬物の体内動態は、投薬時刻によって変動することが指摘されており、CYP3A4の発現および酵素活性に24時間を1周期とする概日リズムがあることが示唆されていた。過去に当研究室では、時計出力因子による転写制御によってCYP3A4の発現や酵素活性に概日リズムが生じることを明らかにしている。しかし、mRNAの発現リズムの振幅に対して、酵素活性のリズムの振幅が顕著に大きいことから、転写制御に加えて転写後の何らかの機構が相まって、酵素活性のリズムが形成されると考えていた。本研究では、転写後におけるCYP3A4の概日リズムの制御機構を明らかにするため、概日時計機構を再構築したヒト肝由来HepaRG細胞を用いて検討を行った。</p><p>【方法】本研究では、3次元条件下で2週間培養することで分化させたHepaRG細胞を用いた。HepaRG細胞に10 μMのForskolin (FSK) を2時間処置して概日時計機構の再構築を行い、ヒト肝細胞における遺伝子発現の概日リズムを観察した。</p><p>【結果・考察】3次元条件下で培養したHepaRG細胞では2次元条件下で培養したHepaRG細胞と比較して、主要な薬物代謝酵素やトランスポーターの発現は上昇したことから、CYPの機能評価に適していると判断した。この条件下においてFSK処置を行ったところ、CYP3A4のタンパク質発現および酵素活性には同時刻にピークを示す概日リズムが認められた。一方で、<i> CYP3A4 </i> mRNAの発現には有意な概日リズムは認められなかったことから、翻訳またはタンパク質の分解過程などでの制御がCYP3A4の概日リズムの形成に関与していることが示唆された。</p><p>【結論】本研究により、CYP3A4の酵素活性の概日リズム形成について新たな知見を得ることができた。今後、その制御機構について解析を行うことで、CYP3A4基質薬物の体内動態おける時刻変動のメカニズムが解明できると考えられた。</p>

DOI： 10.50993/jsptsuppl.44.0_1-c-o07-2

CiNii Research

記述言語：日本語   出版者・発行元：一般社団法人 日本臨床薬理学会  

<p>【目的】肝臓がん患者の10年生存率は約20％と非常に予後が悪く、再発率の高さが問題となっている。肝臓がんの再発率の高さは、その病源にある慢性肝炎や肝硬変の治癒が困難なことに起因しており、慢性肝炎の進行を抑制する手法の開発が求められている。肝炎の進行において重要な役割を担うマクロファージ（MΦ）は、大きく分けて2つのサブタイプ（炎症促進的なM1-MΦと炎症抑制的なM2-MΦ）に分化するが、その分化機構や肝炎との関連には不明点が多い。これまでに当研究室では、新たに同定した抗炎症化合物が、新規炎症関連タンパク質NPIP：Novel-proinflammatory protein（仮称）の機能を抑制すること、時計遺伝子であるBMAL1がNPIPの核内移行を介して炎症反応を制御していることを見出している。しかし、核内NPIPの機能がMΦの分化や肝炎の進行に及ぼす影響については不明である。そこで本研究では、慢性肝炎の治療法構築を目的として、MΦの分化におけるNPIPの機能について解析を行った。</p><p>【方法】NPIPノックアウト（KO）のMΦ様細胞株（RAW264.7）は、CRISPR/Cas9を用いて作製した。MΦ選択的BMAL1 KOマウス（<i>Bmal1</i>cKOマウス）は、<i>LysM-Cre</i>マウスと<i>Bmal1 ^fl/fl</i>マウスを掛け合わせて作製した。慢性肝炎モデルマウスはDiethylnitrosamine (DEN) 80 mg/L含有水を13週間飲水投与することで作製した。MΦ分化の解析にはフローサイトメーターを用いた。</p><p>【結果・考察】 NPIP KOのRAW264.7細胞を用いてMΦの分化について解析した結果、NPIP KO細胞ではM1-MΦへの分化抑制が観察された。また、<i>Bmal1</i> cKOマウスと<i>Bmal1 ^fl/fl</i>マウスから骨髄由来MΦを調製して解析した結果、<i>Bmal1</i> cKOマウスでは核内NPIP量の減少およびM1-MΦへの分化抑制が認められたとともに、NPIPの機能を抑制する抗炎症化合物の効果も消失することが明らかになった。このことからBMAL1によるNPIPの核内移行がM1-MΦの分化に関与していることが示唆された。さらに、DEN誘発慢性肝炎モデルマウスを用いてMΦのBMAL1の機能解析を行った結果、<i>Bmal1</i> cKOマウスでは肝臓がんマーカーの発現量が低下した。以上より、BMAL1-NPIP経路を介して分化したM1-MΦは、炎症を亢進し、慢性肝炎から肝臓がんの進行に寄与していることが示唆された。</p><p>【結論】MΦにおける核内NPIPは、慢性肝炎の新規治療標的になる可能性があると考えられた。</p>

DOI： 10.50993/jsptsuppl.44.0_3-c-o16-3

CiNii Research

記述言語：日本語   出版者・発行元：一般社団法人 日本臨床薬理学会  

<p>【目的】</p><p>がん免疫療法は近年確立された悪性腫瘍に対する主要な治療法である。がん免疫の起点は、マクロファージ（Mφ）によるがん細胞の貪食であり、Mφの機能を制御することで強力な抗腫瘍効果を示すことが明らかになっている。一方、当研究室では非侵襲的な微弱電流刺激（MCS）が生体に及ぼす影響について検討を行っており、時計遺伝子<i>Per1</i>の発現を誘導し、体内時計を調整する方法を構築している¹。そこで、本研究では、MCSが免疫系の中心であるMφに及ぼす影響について、薬理学的解析手法を用いて検討を行った。</p><p>【方法】</p><p>貪食能の評価にはRAW264.7、THP-1、マウスから採取した腹腔Mφを用いた。各分子の発現はリアルタイムPCRまたはウエスタンブロッティングにより測定した。</p><p>【結果・考察】</p><p>まず、MCS処置をしたMφとマウス乳がん細胞株4T1を共培養し、貪食能を評価した。その結果、MCSによりがん細胞に対するMφの貪食能が上昇することが明らかとなった。次に、MφにMCSを行った際の細胞の変化を、マウスMφ細胞株RAW264.7を用いて観察した結果、MCSはMφの分化や免疫チェックポイントには影響せず、アクチン重合を介して貪食能そのものを上昇させることが示唆された。そこで、この詳細な機構についてNGSを起点に解析した結果、MCSが概日時計機構を変容させることでMCS関連キナーゼ（MRK）の発現リズムを低下させ、貪食能上昇をもたらす一連の機構が明らかとなった。また、腹膜播種モデルマウスに対してMCSを実施した結果、MCSが腫瘍へのMφ浸潤を増加させること、およびMφの腫瘍貪食能を上昇させることにより抗腫瘍効果を発揮することが明らかとなった。最後に、MCS処置したMφと種々のがん細胞を共培養し、その貪食能を評価した。その結果、ヒト・マウス双方ともに、乳がん細胞以外においても、多くのがん細胞に対する貪食がMCSにより上昇することが明らかとなった。</p><p>【結論】</p><p>本研究の結果は、MCSがMφの貪食促進を介して抗腫瘍効果を示すことを明らかにしており、がん治療へ応用できる可能性を示唆している。</p><p>１）Matsunaga N, Yoshida Y, et al., <i>BBRC</i>. 2019.</p>

DOI： 10.50993/jsptsuppl.44.0_1-c-o03-1

CiNii Research

記述言語：日本語   出版者・発行元：一般社団法人 日本臨床薬理学会  

<p>【目的】慢性腎臓病 (CKD)は様々合併症を伴うが、なかでも心不全の発症リスクは非常に高く、重度のCKD患者の主な死亡原因となっている。しかしながら、CKD時の心不全を抑制する有効な治療法は確立されていない。一方、当研究室では、CKD時の心臓の炎症と線維化にマクロファージに高発現するG protein coupled receptor 68 (GPR68)が促進的に関与することを明らかにしている (1)。そこで本研究では、CKD時の心不全を抑制する新たな心保護薬の開発を目的に、GPR68の機能を抑制する天然物由来化合物を探索した。</p><p>【方　法】GPR68を高発現するヒト細胞株MDA-MB-231細胞を用いて、GPR68の機能を化学発光にて評価可能な細胞系を構築し、High throughput screening（HTS）を行った。5/6腎摘手術（5/6Nx）を施したICRマウスをCKDマウスとした。</p><p>【結果・考察】単球中GPR68の発現はCKDマウスのみでなく、ヒトCKD患者においても心不全病態と相関が認められた (1)。そこで、ヒトGPR68を阻害する化合物を探索するため、Nuclear factor of activated T cells (NFAT)応答配列（NRE）ルシフェラーゼ活性を指標としたHTS、および候補エキスの毒性試験を行った。その結果、GPR68の機能を抑制するイヌガヤ属植物由来のエキスを同定した。また、RAW264.7にGPR68発現を誘導すると炎症性サイトカインの産生能が上昇するが、エキスの曝露はこの上昇を有意に抑制した。そこで5/6Nxマウスにこのエキスを飲水投与した際の心臓の病態について解析を行った。その結果、5/6 Nxマウスで認められる炎症性サイトカインの増加、心臓の線維化、血中ナトリウム利尿ペプチドの増加のいずれもエキス投与によって有意に抑制された。さらに、心臓の所見のみでなく、5/6 Nxマウスで認められる体重減少や生存率低下についてもエキス投与によって有意に改善した。加えて、このエキスに含まれるアルカロイドから薬効成分を同定し、この成分がエキスと同様の抗炎症作用を有することも明らかにした。以上の結果から、本研究で同定した成分がCKDモデルマウスの心臓におけるGPR68活性阻害を介して炎症および線維化を抑制することが示唆された。</p><p>(1) Yoshida Y. et al., <i>Nature Communications</i>. 2021.</p>

DOI： 10.50993/jsptsuppl.44.0_3-c-o16-4

CiNii Research

記述言語：日本語   出版者・発行元：公益社団法人 日本薬理学会  

Dysfunction of the circadian clock has been implicated in the pathogenesis of cardiovascular disease. Particularly, the CLOCK protein is a core molecular component of the circadian oscillator, so that mice with a mutated <i>Clock</i> gene (<i>Clk/Clk</i>) exhibit abnormal rhythms in numerous physiological processes. In this study, we analyzed the relationship between heart failure and <i>Clock</i> in 5/6 nephrectomy (5/6Nx) mice, which induce heart failure by chronic kidney disease (CKD). Surprisingly, cardiac inflammation and fibrosis were attenuated in <i>Clock</i> mutant (<i>Clk/Clk</i>) 5/6Nx mice even though they had high blood pressure and increased serum angiotensin II levels. A search for the underlying cause of the attenuation of heart disorder led to identification of the monocytic expression of G protein-coupled receptor 68 (GPR68) as a risk factor of CKD-induced inflammation and fibrosis of heart. 5/6Nx induced the expression of GPR68 in circulating monocytes via altered CLOCK activation by increasing serum levels of retinol and its binding protein (RBP4). The high-GPR68-expressing monocytes had increased potential for producing inflammatory cytokines, and their cardiac infiltration under CKD conditions exacerbated inflammation and fibrosis of heart. Our present study reveals an uncovered role of monocytic clock genes in CKD-induced heart failure.

DOI： 10.1254/jpssuppl.96.0_1-b-s02-3

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記述言語：日本語   出版者・発行元：一般社団法人 日本臨床薬理学会  

<p>【目的】腎臓は様々な臓器と連関しているため、慢性腎臓病 (CKD)が生体に及ぼす影響は多岐に渡る。その一つとして、腸内細菌が乱れた状態 (ディスバイオシス)が引き起こされることが近年報告されている。腸内細菌はインドキシル硫酸 (IS)等の一部の尿毒症物質の産生源であり、CKDの病態悪化への寄与が疑われているが、具体的な機構は十分に解析されていない。一方で我々は、CKDマウスを用いた解析により、CKD時に肝臓にてビタミンA (VA)の代謝不全が生じることを報告している^1,2。VAは腸管免疫を司る重要な分子であるため、CKD時のディスバイオシスへの関与が疑われる。そこで本研究ではVAに着目し、腸内細菌の変容ならびに腸内細菌由来物質の増加機構について解析を行った。</p><p>【方法】ICRマウスの腎臓を5/6摘出し、その後8週間飼育することでCKDマウス (5/6 Nephrectomy: 5/6Nx)を作製した。また、対照としてSham群を作製し、各種解析を行った。血中の因子測定はLC-MS/MSを用い、タンパク質発現量はウェスタンブロット法を用いて測定した。</p><p>【結果・考察】まずCKD患者の血清を解析した結果、血中VA濃度と腎障害に相関が認められた。そこでVAと尿毒症物質との関連を明らかにするため、5/6NxマウスにVA不含給餌を行った結果、SCrやBUNは減少しなかったにもかかわらず、IS等の腸内細菌産生尿毒症物質のみ血中濃度が低下することを発見した。この原因を明らかにするため、5/6Nxマウスにおける腸管免疫に着目し解析を行ったところ、VA不含給餌は5/6Nxマウスの腸管内で亢進するIgA分泌を抑制し、菌叢を再変容させることが明らかになった。このことは、5/6NxマウスではVAを介して腸管免疫機能が亢進していることを示唆している。そこで腸管の免疫細胞を対象とした詳細な解析を行った結果、5/6Nxマウスではパイエル板における樹状細胞のレチノイン酸合成能が亢進し、B細胞からIgA産生細胞への分化が促進されることが明らかになった。さらに、阻害剤を用いたこれら経路の抑制は、5/6Nxマウス腸管のIgA量およびIS等の血中濃度を低下させた。</p><p>【結論】以上の結果より、VAおよび腸管の免疫細胞を介した新たな腎-腸連関機構を解明した。本研究のさらなる解析が、新規治療薬の開発に繋がることが期待される。</p><p>【参考文献】</p><p>1. Yoshida Y, Matsunaga M, Ohdo S, et al., <i>Nat. Commun.</i> 2021.</p><p>2. Hamamura K, Matsunaga M, Ohdo S, et al., <i>J. Bio. Chem.</i> 2016.</p>

DOI： 10.50993/jsptsuppl.43.0_2-c-p-084

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記述言語：日本語   出版者・発行元：一般社団法人 日本臨床薬理学会  

<p>【目的】乳がんは女性の年間罹患者数が最も多いがん種であり、現代においても未だに罹患数・死亡者数は増加の一途を辿っている。この大きな原因は既存の治療薬に対して高い抵抗性を有するトリプルネガティブ乳がん (Triple Negative Breast Cancer; TNBC) の存在であり、TNBCに対する有効な治療法の開発が望まれている。一方、創傷治癒や疼痛緩和に頻用される外部デバイスを用いた微弱電流刺激は様々な細胞内シグナル応答に影響を与えることが示唆されている。しかしその詳しい機序やがん細胞への影響は未解明な点が多く、がん治療への応用はなされていない。そこで本研究は微弱電流刺激 (Microcurrent stimulation; MCS)がTNBCに与える影響を解析するとともに、マイクロ電流刺激を用いた新規TNBC治療法の確立を目指した。【方法】担癌モデルマウス作製には5週齢BALB/c雌性ヌードマウスを用い、MCSにはES-530およびPALS Electrodeを用いた。mRNA発現量はリアルタイムRT-PCR法、タンパク発現量はWestern Blotにより測定した。また、アポトーシス細胞数の測定にはFACSを用いた。【結果・考察】ヒト正常乳腺細胞および乳癌細胞株に対してMCSを行い、細胞生存率への影響を評価した。その結果、乳癌細胞株においてのみMCSによって生存率が低下した。この原因を探索したところ、MCSが癌細胞特異的に、細胞内金属イオン濃度の増加に伴うアポトーシスを誘導することが示唆された。また、ヒトTNBC細胞株MDA-MB-231は化学療法に対する抵抗性を有し、特に5-FU感受性が低いことが報告されている。そこでMDA-MB-231に対してMCSを行ったところ、5-FU抵抗性が改善し、通常5-FUが殺細胞効果を示さない濃度においてもアポトーシスを誘導することが明らかになった。さらに、MDA-MB-231を移植した担癌モデルマウスを作製し、MCSと5-FU投与を行った結果、それぞれ単独処置では有意な抗腫瘍効果は認められなかったにもかかわらず、両処置の併用によって極めて高い抗腫瘍効果を示すことが明らかになった。【結論】以上の結果から、MCSがヒトTNBC細胞で癌細胞選択的なアポトーシス誘導効果を有すること、および5-FU感受性を改善し、5-FUの抗腫瘍効果を増強することが明らかとなった。今後、これらの技術を応用し、既存治療に変わる、または既存治療による負担を軽減し得る新たなTNBC治療の創出へと応用したい。</p>

DOI： 10.50993/jsptsuppl.43.0_3-c-p-130

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開催年月日： 2022年12月

記述言語：日本語  

開催地：横浜   国名：日本国  

Dysfunction of the circadian clock has been implicated in the pathogenesis of cardiovascular disease. Particularly, the CLOCK protein is a core molecular component of the circadian oscillator, so that mice with a mutated Clock gene (Clk/Clk) exhibit abnormal rhythms in numerous physiological processes. In this study, we analyzed the relationship between heart failure and Clock in 5/6 nephrectomy (5/6Nx) mice, which induce heart failure by chronic kidney disease (CKD). Surprisingly, cardiac inflammation and fibrosis were attenuated in Clock mutant (Clk/Clk) 5/6Nx mice even though they had high blood pressure and increased serum angiotensin II levels. A search for the underlying cause of the attenuation of heart disorder led to identification of the monocytic expression of G protein-coupled receptor 68 (GPR68) as a risk factor of CKD-induced inflammation and fibrosis of heart. 5/6Nx induced the expression of GPR68 in circulating monocytes via altered CLOCK activation by increasing serum levels of retinol and its binding protein (RBP4). The high-GPR68-expressing monocytes had increased potential for producing inflammatory cytokines, and their cardiac infiltration under CKD conditions exacerbated inflammation and fibrosis of heart. Our present study reveals an uncovered role of monocytic clock genes in CKD-induced heart failure.

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開催年月日： 2021年12月

記述言語：日本語   会議種別：シンポジウム・ワークショップ パネル（公募）  

開催地：宮城   国名：日本国  

開催年月日： 2021年7月

記述言語：日本語   会議種別：口頭発表（一般）  

開催地：沖縄 (オンライン)   国名：日本国  

開催年月日： 2020年12月

記述言語：日本語   会議種別：シンポジウム・ワークショップ パネル（公募）  

開催地：福岡 (オンラインとのハイブリッド開催)   国名：日本国  

開催年月日： 2019年11月

記述言語：日本語   会議種別：口頭発表（一般）  

国名：日本国  

開催年月日： 2018年10月

記述言語：日本語   会議種別：シンポジウム・ワークショップ パネル（公募）  

開催地：長崎   国名：日本国  

開催年月日： 2024年3月

記述言語：日本語   会議種別：口頭発表（一般）  

開催地：横浜   国名：日本国  

開催年月日： 2024年3月

記述言語：日本語   会議種別：口頭発表（一般）  

開催地：横浜   国名：日本国  

開催年月日： 2024年3月

記述言語：日本語  

開催地：横浜   国名：日本国  

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開催年月日： 2024年3月

記述言語：日本語  

開催地：横浜   国名：日本国  

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開催年月日： 2023年12月

記述言語：日本語   会議種別：口頭発表（一般）  

開催地：神戸   国名：日本国  

開催年月日： 2023年12月

記述言語：日本語   会議種別：口頭発表（一般）  

開催地：神戸   国名：日本国  

開催年月日： 2023年12月

記述言語：日本語   会議種別：口頭発表（一般）  

開催地：神戸   国名：日本国  

開催年月日： 2023年12月

記述言語：日本語  

開催地：神戸   国名：日本国  

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開催年月日： 2023年12月

記述言語：日本語  

開催地：神戸   国名：日本国  

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開催年月日： 2023年12月

記述言語：日本語  

開催地：神戸   国名：日本国  

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開催年月日： 2023年10月

記述言語：日本語   会議種別：口頭発表（一般）  

開催地：横浜   国名：日本国  

開催年月日： 2023年10月

記述言語：日本語   会議種別：口頭発表（一般）  

開催地：横浜   国名：日本国  

開催年月日： 2023年10月

記述言語：日本語  

開催地：横浜   国名：日本国  

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開催年月日： 2023年10月

記述言語：日本語  

開催地：横浜   国名：日本国  

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開催年月日： 2023年9月

記述言語：日本語   会議種別：口頭発表（一般）  

開催地：福岡   国名：日本国  

開催年月日： 2023年9月

記述言語：日本語   会議種別：口頭発表（一般）  

開催地：福岡   国名：日本国  

開催年月日： 2023年9月

記述言語：日本語   会議種別：口頭発表（一般）  

開催地：福岡   国名：日本国  

開催年月日： 2023年9月

記述言語：日本語   会議種別：口頭発表（一般）  

開催地：福岡   国名：日本国  

開催年月日： 2023年9月

記述言語：日本語   会議種別：口頭発表（一般）  

開催地：福岡   国名：日本国  

開催年月日： 2023年9月

記述言語：日本語   会議種別：口頭発表（一般）  

開催地：福岡   国名：日本国  

開催年月日： 2023年9月

記述言語：日本語   会議種別：口頭発表（一般）  

開催地：福岡   国名：日本国  

開催年月日： 2023年9月

記述言語：日本語  

開催地：福岡   国名：日本国  

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開催年月日： 2023年9月

記述言語：日本語  

開催地：福岡   国名：日本国  

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開催年月日： 2023年9月

記述言語：日本語  

開催地：福岡   国名：日本国  

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開催年月日： 2023年9月

記述言語：日本語  

開催地：福岡   国名：日本国  

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開催年月日： 2023年9月

記述言語：日本語  

開催地：福岡   国名：日本国  

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開催年月日： 2023年9月

記述言語：日本語  

開催地：福岡   国名：日本国  

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開催年月日： 2023年9月

記述言語：日本語  

開催地：福岡   国名：日本国  

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開催年月日： 2023年3月

記述言語：日本語   会議種別：口頭発表（一般）  

開催地：北海道   国名：日本国  

開催年月日： 2023年3月

記述言語：日本語   会議種別：口頭発表（一般）  

開催地：北海道   国名：日本国  

開催年月日： 2023年3月

記述言語：日本語   会議種別：口頭発表（一般）  

開催地：北海道   国名：日本国  

開催年月日： 2023年3月

記述言語：日本語  

開催地：北海道   国名：日本国  

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開催年月日： 2023年3月

記述言語：日本語  

開催地：北海道   国名：日本国  

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開催年月日： 2023年3月

記述言語：日本語  

開催地：北海道   国名：日本国  

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開催年月日： 2022年12月

記述言語：日本語   会議種別：シンポジウム・ワークショップ パネル（公募）  

開催地：横浜   国名：日本国  

開催年月日： 2022年12月

記述言語：日本語   会議種別：シンポジウム・ワークショップ パネル（公募）  

開催地：横浜   国名：日本国  

開催年月日： 2022年12月

記述言語：日本語  

開催地：横浜   国名：日本国  

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開催年月日： 2022年12月

記述言語：日本語  

開催地：横浜   国名：日本国  

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開催年月日： 2022年11月

記述言語：日本語   会議種別：口頭発表（一般）  

国名：日本国  

開催年月日： 2022年11月

記述言語：日本語   会議種別：口頭発表（一般）  

国名：日本国  

開催年月日： 2022年11月

記述言語：日本語   会議種別：口頭発表（一般）  

国名：日本国  

開催年月日： 2022年11月

記述言語：日本語  

国名：日本国  

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開催年月日： 2022年11月

記述言語：日本語  

国名：日本国  

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開催年月日： 2022年11月

記述言語：日本語  

国名：日本国  

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開催年月日： 2022年10月

記述言語：日本語   会議種別：口頭発表（一般）  

開催地：長崎   国名：日本国  

開催年月日： 2022年10月

記述言語：日本語   会議種別：口頭発表（一般）  

国名：日本国  

開催年月日： 2022年10月

記述言語：日本語   会議種別：口頭発表（一般）  

国名：日本国  

開催年月日： 2022年10月

記述言語：日本語  

国名：日本国  

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開催年月日： 2022年10月

記述言語：日本語  

国名：日本国  

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開催年月日： 2022年10月

記述言語：日本語  

開催地：長崎   国名：日本国  

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開催年月日： 2022年3月

記述言語：日本語   会議種別：口頭発表（一般）  

開催地：名古屋   国名：日本国  

開催年月日： 2022年3月

記述言語：日本語  

開催地：名古屋   国名：日本国  

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開催年月日： 2021年11月

記述言語：日本語   会議種別：口頭発表（一般）  

開催地：東京   国名：日本国  

開催年月日： 2021年7月

記述言語：日本語   会議種別：口頭発表（一般）  

国名：その他  

開催年月日： 2020年12月

記述言語：日本語   会議種別：シンポジウム・ワークショップ パネル（公募）  

開催地：福岡   国名：日本国  

開催年月日： 2020年12月

記述言語：日本語   会議種別：シンポジウム・ワークショップ パネル（公募）  

開催地：福岡   国名：日本国  

開催年月日： 2020年12月

記述言語：日本語   会議種別：シンポジウム・ワークショップ パネル（公募）  

開催地：福岡   国名：日本国  

開催年月日： 2019年11月

記述言語：日本語   会議種別：口頭発表（一般）  

開催地：長崎   国名：日本国  

開催年月日： 2018年11月

記述言語：日本語   会議種別：口頭発表（一般）  

開催地：福岡   国名：日本国  

開催年月日： 2018年10月

記述言語：日本語   会議種別：シンポジウム・ワークショップ パネル（公募）  

開催地：長崎   国名：日本国  

開催年月日： 2018年6月

記述言語：日本語   会議種別：シンポジウム・ワークショップ パネル（公募）  

開催地：福岡   国名：日本国  

開催年月日： 2017年12月

記述言語：日本語   会議種別：口頭発表（一般）  

開催地：熊本   国名：日本国  

開催年月日： 2017年12月

記述言語：日本語   会議種別：口頭発表（一般）  

開催地：熊本   国名：日本国  

開催年月日： 2017年10月

記述言語：日本語   会議種別：シンポジウム・ワークショップ パネル（公募）  

開催地：福岡   国名：日本国  

開催年月日： 2017年10月

記述言語：日本語   会議種別：シンポジウム・ワークショップ パネル（公募）  

開催地：福岡   国名：日本国  

開催年月日： 2017年8月

記述言語：日本語   会議種別：口頭発表（一般）  

開催地：大分   国名：日本国  

開催年月日： 2014年11月

記述言語：日本語   会議種別：シンポジウム・ワークショップ パネル（公募）  

開催地：福岡市   国名：日本国  

開催年月日： 2014年9月

記述言語：日本語   会議種別：口頭発表（一般）  

開催地：名古屋   国名：日本国  

記述言語：日本語  

記述言語：日本語  

記述言語：日本語  

記述言語：日本語  

記述言語：日本語  

記述言語：日本語  

記述言語：日本語  

記述言語：日本語  

記述言語：英語  

記述言語：日本語  

記述言語：英語  

記述言語：日本語  

記述言語：日本語  

記述言語：日本語  

記述言語：日本語  

記述言語：日本語  

記述言語：英語  

記述言語：日本語  

記述言語：日本語  

記述言語：日本語  

種別：大会・シンポジウム等 

種別：大会・シンポジウム等 

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種別：大会・シンポジウム等 

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種別：査読等 

外国語雑誌　査読論文数：2

種別：大会・シンポジウム等 

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種別：大会・シンポジウム等 

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